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    高效液相色谱荧光快速测定保健食品中的叶酸

    2016年03月01日 14:48  来源:中国干果?#29992;?#32593;  作者:[db:作者]  人气:318

      高效液相色谱荧光快速测定保健食品中的叶酸黄宏南陈宏靖黄健文2(1福建省卫生防疫站,福州350001;2福建医科大学,福州350004)0657.7于食品成分比较复杂,试样处理烦琐费?#20445;?#32780;测定的是叶酸?#20301;?#24615;,需制备各种培养基和菌种,步骤多又费试剂。本文采用反相篼效液相色谱荧光法测定保健食品中的叶酸含量,方法简单、快速且准确度及精密度都能满足分析要求。

      1材料和方法1.1仪器与试剂LC-4A高效液相色谱仪,RF-510LC荧光检测器,C-R1B色谱处理机,日本?#33322;?#20844;司产品。甲醇HPLC级,石英亚沸高纯水,叶酸标准储备液精?#28902;?#21462;叶酸标准品(由Sigma公司出品)50mg加入检测用流动相溶液定容为50ml,置4冰箱内储存、有效期为1~2个月。临用时用流动相溶液稀释成lOfig/ml. 1.2试样处理称取0.5g~l.Og研细的试样于10ml离心管中,加入流动相溶液10ml,超声波提取15min,取出加流动相定容10ml,摇匀,用0.45/m微孔过滤,滤液用作HPLC分析1.3色谱条件色谱柱:shim柱温:室温焚光检测器:=365nm,Em流动相。甲醇:水=30:70流速:Iml/min进样量:10pd. 1.4计算在给定仪器条件下进行试样测定,以保留时间定性,峰面积外标法定量,计算试样含量XV V定容后的体积,mlC一标准溶液浓度,2结果与讨论2.1色谱柱的选择自从70年代中期,化学键合相色谱的发展十分迅速,已有报道用于叶酸的分离。W由于保健食品中叶酸大多?#26434;卫?#24418;式存在,不含磷酸根,所以最适合用C18填料RP-HPLC分离。

      2.2检测波长的选择对叶酸标准溶液进行荧光光谱扫描,其最大激发波长为365nm,最大发射波长为450ran,因此我们选择Ex=365nra,Em=450nm进行测定,具有较高灵敏度。

      2.3流动相的选择叶酸属维生素B族类物质,?#34892;?#23558;其写成维生素Bc考虑到B族维生素在甲醉:水=30:70流动相体?#30340;?#24471;到较好的分离,而且保健食品中的维生素通常是多种混合体,为了达到同时、快速测量,减少体?#21040;换黄?#34913;时间,我们选择以上流动相体系,实验证明在出峰时间,洗脱效果,排除杂质干扰方面效果理想。

      2.4检测浓度的线性范围分别配制浓度为5,10,20,30,40,的叶酸标准溶液,在给定仪器条件下进行HPLC分析,以峰面积对浓度做校正曲线,得线性回归方程和相关系数分别为:Y= 2.5方法精密度精密称取少儿健维士(多种维生素补充剂)2.6方法准确度精密称取少儿健维士粉0.4g,加人0.5ml叶酸标准溶液,按试样测定步骤操作测定6次,其平均回收率为98.67%,RSD为1.83%. 3小结本方法简便、快速、灵敏度高,其精密度、准确度均达到分析要求。适合保健食品中叶酸的测定。

    (完)

     
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